加入收藏
百奥莱博公司客服电话百奥莱博QQ百奥莱博QQ百奥莱博QQ
百奥莱博公司微信服务号

产品目录

M-MLV反转录酶(缺失RNase H活性)图片
产品货号:
RFT104
中文名称:
M-MLV反转录酶(缺失RNase H活性)
英文名称:
M-MLV Reverse Transcriptase(RNase H-)
产品规格:
2000U
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
M-MLV反转录酶(RNase H-)是一种经过改造和优化的反转录酶。和普通的M-MLV反转录酶相比,缺失了Ribonuclease H (RNase H)酶活性,不能够选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA,可以合成长片段从DNA。


M-MLV反转录酶(RNase H-)可以合成长达9~13kb的cDNA。该反转录酶的最适反应温度为42~45℃并且在55℃时仍然有很高活性,可以避免普通的M-MLV反转录酶(RNase H-)在37℃反应时的一些不足。


M-MLV反转录酶(RNase H-)常用于在获得总RNA或mRNA后cDNA第一条链的合成。合成的cDNA第一条链后续可以用于PCR、real-time PCR、cDNA第二条链的合成等。


该反转录酶(RNase H-)由大肠杆菌表达。


One unit of the enzyme incorporates 1nmol of dTMP into a polynucleotide fraction in 10min at 37℃。
活性检测条件:
50mM Tris-HCl (pH8.3),6mM MgCl2,10mM DTT,40mM KCl,0.5mM dTTP,0.4M Bq/ml [3H]-dTTP 0.4mM polyA·oligo(dT)12-18.


组分规格
Reverse Transcriptase M-MLV(RNase H-,200U/μL)10μL
5×RT buffer200μL

保存:-20℃


2000U的本产品用于体积为20μL的反转录体系时足够进行10次反转录反应。


50mM Tris(pH8.3),100mM NaCl,1mM EDTA,5mM DTT,0.1% Triton X-100,50% glycerol。


5×RT buffer:
250mM Tris,pH8.3 at 25℃,250mM KCl,20mM MgCl2,50mM DTT。


不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶和RNA酶,可以满足常规反转录合成cDNA第一条链等的需要。


70℃孵育10分钟可以导致M-MLV反转录酶(RNase H-)失活;EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚氨(polyamine)对该反转录酶(RNase H-)有抑制作用。


cDNA第一链合成:

  • 0.2mL PCR管中配制模板/引物变性混合液:
    加样顺序成分使用量
    1模板RNA1ng~1μg
    2Oligo(dT)12-18primer(50μM)
    or Random primer(25μM)
    or Specific primer(10μM)
    1μL

    注:Total RNA的使用量一般为1ng~1μg,mRNA的使用量一般为10pg~1μg。
  • 70℃保温10分钟后迅速在冰上急冷2分钟以上。
    注:此步骤是打开RNA的一些比较稳定的二级结构。
  • 离心数秒钟使模板RNA/引物的变性混合液聚集于离心管底部。
  • 在上述离心管中配制下列反转录反应液。
    加样顺序成分使用量
    1模板/引物变性混合液6μL
    25×RT buffer2μL
    310mM dNTP0.5μL
    4RNase Inhibitor(40U/μL)0.25μL
    5M-MLV(RNase H-)0.25~1μL
    6RNase-free水up to 10μL

    注:当起始模板RNA量>500ng时,M-MLV(RNase H-)的使用量应>0.25μL。
  • 42℃保温1小时。
    注:以Random Primers作为反转录引物时应先进行30℃,10分钟反应,然后再在42℃条件保温1小时。
  • 70℃保温15分钟后冰上冷却,得到的cDNA溶液可直接用于PCR扩增,PCR扩增时cDNA溶液的使用量50μL体系加2μL。

相关搜索:M-MLV反转录酶(缺失RNase H活性)MMLV反转录酶M-MuLV反转录酶M-MLV反转录酶(没有RNase H活性)逆转录酶M-MLV Reverse Transcriptase(RNase H-)
首页 |  关于我们 |  联系我们 |  在线咨询 |  网站地图
北京百奥莱博科技有限公司 京ICP备14007103号-3